Chef(s) de projet: Giovanna Mendoza-Mujica
Problème
La maladie de Carrion est une maladie endémique dans les pays andins, comme le Pérou, l’Équateur et la Colombie. Au Pérou, elle pose un problème majeur de santé publique dans les collectivités endémiques qui vivent dans une pauvreté extrême et dans de mauvaises conditions d’hygiène.
L’agent étiologique est Bartonella bacilliformis, un micro-organisme qui envahit les globules rouges humains, provoquant une phase aiguë caractérisée par une fièvre pouvant entraîner une anémie de gravité variable, avec un taux de mortalité de 44 % à 88 % chez les patients qui ne reçoivent pas de traitement antibiotique approprié.
Le diagnostic pendant la phase aiguë peut se faire par l’obtention d’un frottis de sang périphérique avec tache Giemsa, mais ce test a une faible sensibilité et requiert des analyses de laboratoire. Les méthodes de diagnostic sérologiques, comme le Western Blot (WB), pourraient offrir des solutions de rechange en raison de leur action rapide et de leur sensibilité et spécificité élevées, permettant une détection précoce des cas.
Solution
Ce projet visait à élaborer un test de diagnostic de la maladie de Carrion en utilisant la technique Western Blot, qui serait sensible, peu coûteux, facile à appliquer et susceptible d’être utilisé au niveau des soins primaires.
Des souches de Bartonella bacilliformis provenant de différents milieux endémiques au Pérou ont été réactivées, puis soumises à des vibrations ultrasoniques pour améliorer le processus d’acquisition d’antigènes. La quantification des protéines a été faite à l’aide de la méthode de Bradford et les profils de bandes antigéniques des souches aiguës et éruptives ont été identifiés par électrophorèse.
Les antigènes ont ensuite été purifiés et transférés sur du papier de nitrocellulose, et ces bandes antigéniques ont été évaluées avec des sérums provenant de patients en phase aiguë et éruptive.
La validation de la méthode Western Blot s’est faite en évaluant les paramètres statistiques de la sensibilité du diagnostic, de la spécificité analytique et diagnostique, de la répétibilité, de la reproductibilité et de la corrélation avec la méthode de dépistage (ELISA).
Résultat
La méthode Western Blot est un outil fiable pour le diagnostic sérologique des patients atteints de la maladie de Carrion. L’équipe a déterminé que pour le test de confirmation interne de WB, quatre bandes réactives (131,47, 122,60, 61,37 et 57.05 KDa) étaient présentes dans le sérum à contrôle positif, et absent dans les échantillons témoins positifs ou négatifs des autres étiologies.
Il a été établi que la méthode était répétable à 100 % et reproductible à 100 % avec des mesures qualitatives, et qu’elle avait une sensibilité de 95,5 % et une spécificité de 97 %, et des valeurs prédictives situées des paramètres acceptables.
En suivant les procédures et les protocoles établis pour la méthode Western Blot interne, 600 bandes antigéniques ont été produites et employées pour confirmer le diagnostic sérologique des patients montrant des signes et des symptômes cliniques de la maladie de Carrion dans des régions endémiques.
Un groupe de huit professionnels de la santé de cinq laboratoires régionaux et de trois laboratoires intermédiaires ayant le plus grand nombre de cas de patients atteints de la maladie de Carrion a été formé pour la mise en place de cette méthode de diagnostic.
L’équipe a l’intention d’intensifier la production de deux trousses commerciales pour le diagnostic de la maladie de Carrion (ELISA pour le dépistage et WB pour la confirmation), qui seraient développées au Centre national pour les produits biologique, de l’Institut national de la santé, en coordination avec le ministère péruvien de la Santé.